ABSTRACT
LYT1 is a molecule with lytic activity under acidic conditions that, as genetically demonstrated, participates in the infection and stage transition of T. cruzi. The differing functions of this protein result from alternative trans-splicing, resulting in proteins that contain either a secretion and nuclear sequence (LYT1s) or the nuclear sequence alone (LYT1n). To determine the localization of different LYT1 products, transgenic parasites expressing LYT1s or LYT1n fused to the enhanced green fluorescence sequence were analyzed. LYT1s-EGFP localized to the flagellum, vacuoles, membrane and regions of the nucleus and kinetoplast; LYT1n-EGFP localized to the nucleus and kinetoplast, and occasionally in vacuoles. These results show that even though different LYT1 products localize to the same sites, they are also found in different intracellular organelles and microenvironments, which could influence their multifunctional behavior.
LYT1 es una molécula con actividad lítica en condiciones ácidas, que según se demostró genéticamente, participa en el proceso de infección y transición de estadio de T. cruzi. Su diferente funcionalidad es resultado de la producción de dos proteínas, obtenidas por trans-empalme alternativo, que contienen una secuencia de secreción y una nuclear (LYT1s) o únicamente la secuencia nuclear (LYT1n). Para evaluar la localización de los diferentes productos de LYT1, se analizaron parásitos transgénicos que expresan la secuencia de LYT1s o LYT1n fusionada con la secuencia de la verde fluorescente. LYT1s-EGFP se localiza en flagelo, vacuolas, membrana y región del núcleo y cinetoplasto; mientras que, LYT1n-EGFP se localiza en la región del núcleo y cinetoplasto, y ocasionalmente en vesículas. Estos resultados muestran que aún cuando los distintos productos de LYT1 comparten algunos sitios de localización, también se encuentran en distintos organelos y microambientes intracelulares que podrían influir en su comportamiento multifuncional.
ABSTRACT
Por medio de video-microscopía de contraste acentuado electrónicamente, se consiguió el primer análisis cinemático de la descarga del filamento polar y el esporoplasma por esporas de un microsporidio. La estimulación in vitro de esporas de Nosema algerea, un parásito de los mosquitos, provoca la salida explosiva del filamento polar con una velocidad instantánea máxima de 105 µm/s en promedio, seguida por la expulsión del esporoplasma en el extremo del filamento luego de un lapso variable con un máximo de 500 ms. La descarga total se completa en menores de 2 s. La morfología de la parte del filamento ya descargada en cada instante no cambia durante la salida, lo que sugiere que el alargamiento ocurre tan solo en el extremo distal, conforma a la opinión de que el filamento es extruido por eversión. Por lo común, la longitud del filamento disminuye entre 5 y un 10 por ciento después de la expulsión del esporoplasma, lo que indica elasticidad del material constitutivo y presurización interna durante el proceso. Una vez liberado el esporoplasma aumenta de volumen, como es de esperar de una alta presión osmótica residual que, de acuerdo con la hipótesis prevaleciente, es ocasionada por la estimulación. Los resultados apoyan el modelo de que las esporas de los microsporidios germinan cuando el estímulo causa un aumento de presión osmótica interna, que a su vez determina un influjo de agua de manera que la presión hidrostática se eleva y finalmente rompe la tapa polar de la espora, por donde son entonces expulsados el filamento y enseguida el esporoplasma.